要问一抗[第一抗体就是能和非抗体性抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白。]孵育[孵育，读音fū yù ，汉语词语，解释为孵；孵化。]时间[时间英文名Time。]不能超过多久，据悉一抗的孵育时间与温度、抗体[抗体（Antibody），又称免疫球蛋白（Immunoglobulin，简称 Ig），是一种由B细胞分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等-kangti]浓度[是分析化学中的一个名词。]有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性[通过体外培养患者自身的抗癌细胞，然后回输到患者体内，达到科学抗癌的目的。]吸附，增加洗涤[ 洗涤是个可逆过程，已从织物上除去的污垢有可能再返回到织物上。]的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色[显色是将被吸附在纤维上的染料或“中间体”进行固色或用化学方法使之显色并固色的处理工艺。]。
一、一抗孵育时间，不能超过多久
1、一抗的定义
一抗指的是能够和非抗体性抗原[抗原（antigen，缩写Ag）为任何可诱发免疫反应的物质。]（特异性抗原）特异性结合的蛋白，也就是平常所说的抗体。二抗指的是能和抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，放大一抗的信号。
2、一抗的孵育时间
（1）一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。
（2）如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。
二、双抗体夹心法检测未知抗原
1、包被
用0.05M碳酸盐包被缓冲液[当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液pH变化的作用，称为缓冲作用，这样的溶液叫做缓冲溶液。]（ph9.6）对抗体进行稀释[稀释（英语：dilution）指对现有溶液加入更多溶剂而使其浓度减小的过程。]，直至蛋白质含量为1-10g/ml为止。在每个聚苯乙烯板的反应[反应指有机体受体内或体外的**而引起的相应的活动，也指物质受作用而引起变化的现象和过程。]孔中[孔中，北京酷米网络科技有限公司创始人，北京亿评网络科技有限公司发起人，CEO；2010年，创办酷米网，在其领导下，酷米网不断发展壮大，成为国内领先的动画视频网站。]加0.1ml，4℃过夜。第二天的时候，去掉孔内溶液，然后用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
2、加样
将0.1ml经过稀释的待检样品放到反应孔中，在37℃的环境条件下孵育1小时，然后进行洗涤。
3、加酶标抗体
在各个反应孔中，加入0.1ml新鲜稀释的酶标抗体，在37℃的环境条件下，孵育0.5-1小时，然后进行洗涤。
4、加底物[底物为参与生化反应的物质，可为化学元素、分子或化合物，作用可形成产物。]液显色
在各个反应孔中，加入0.1mlTMB底物溶液（应当临时配制），37℃的环境条件下10-30分钟。
5、终止反应
在各个反应孔孔中，加入0.05ml的2M硫酸。
6、结果测试
（1）在白色背景下，用肉眼进行观察即可。反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。
（2）在ELISA检测仪[检测仪应用十分广泛，主要应用于石化工业、电力工业、航空造船业、造纸业、纺织业、冶金工业等。]上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，如果大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。